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            四川地區養殖鯽鯉皰疹病毒Ⅱ型的鑒定及病理學研究

            發表時間:2022/4/22 23:50:56  來源:水產學報  作者:周瑤佳 等人  瀏覽次數:350  
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            摘要:為探究疾病病因和流行特點,對患病鯽進行剖檢、病理學觀察、分子生物學檢測及人工感染實驗。結果顯示,患病鯽臨床表現為離群獨游、浮頭、全身發黑及體表出血等。剖檢發現鰓、肝臟、腎臟等器官出血、腫脹和壞死,鰾點狀出血。組織病理觀察顯示,鰓呼吸上皮細胞腫脹、壞死及脫落;腎臟局灶性壞死;脾臟組織廣泛變性壞死,造血系統崩解;肝臟發生空泡變性和壞死。透射電鏡觀察到脾臟和腎臟中存在 4 種大小不同的病毒顆粒,分別為 DNA 病毒內核、空衣殼、實心衣殼和有包膜的成熟病毒粒子。未成熟的病毒粒子存在于細胞核,成熟的病毒粒子存在于細胞質。電鏡下可見鯉皰疹病毒Ⅱ型 (CyHV-2) 在細胞核內完成核酸復制和核衣殼裝配,囊膜蛋白在出核后獲得。細胞核萎縮、核染色質邊緣化,線粒體腫脹、壞死、嵴斷裂,細胞質空泡化。取患病鯽組織勻漿濾菌后接種到鯉上皮瘤細胞系 (epithelioma papulosum cyprinid cell line,EPC) 和胖頭鯉肌肉細胞系 (fathead minnow cell line, FHM),盲傳 3 代后未見細胞病變。通過腹腔注射患病鯽組織勻漿進行人工感染實驗,實驗組鯽表現出與自然感染鯽相同的臨床癥狀,對照組鯽正常,實驗組累積死亡率為 80%。用 PCR 方法檢測 CyHV-2 的解旋酶基因片段,擴增出預期大小相符的目的條帶。利用鄰近法對該病毒的解旋酶基因進行系統發育分析,結果顯示與 CyHV-2(YZ-01) 的同源性為 99%。以上實驗結果證實了 CyHV-2 是導致這次疾病暴發的原因。

            關鍵詞: 鯽;鯉皰疹病毒Ⅱ型;組織病理;超微病理

            中圖分類號: S941.41 文獻標志碼: A

            鯉皰疹病毒Ⅱ型 (Cyprinid herpesvirus Ⅱ,CyHV-2), 屬于皰疹病毒科 (Alloherpesviridae)、鯉皰疹病毒屬 (Cyprinivirus) [1],主要感染金魚(Carassius auratus auratus)、鯽(C. auratus) 及其變種,呈世界范圍流行,發病迅速,死亡率高達80%。1992年秋季和1993年春季,CyHV-2 感染造成了日本愛知及奈良縣養殖的金魚相繼暴發以造血器官壞死為特征的疾病,死亡率為 100%,因而將該病命名為金魚造血器官壞死癥 [2] 。此后,CyHV-2 在世界范圍內傳播流行,相繼在美國、匈牙利、澳大利亞、英國、捷克、中國、意大利、法國和塞爾維亞被報道,造成了金魚或鯽的大規模死亡 [3-14] 。該病的發病季節為春、秋兩季,適宜水溫為 15~25 °C,在此范圍內疾病的發病率和死亡率隨水溫的上升而增加,當水溫超過 27 °C 時死亡率迅速降低 [2-3, 8] 。雖然世界動物衛生組織 (World Organization for Animal Health,OIE) 還未將 CyHV-2 納入檢疫目錄,但我國農農村部已將其納入全國疫病監測范圍。

            自 2012 年起,CyHV-2 的傳入給我國東部地區的鯽養殖業造成了極大的經濟損失,每年都有 CyHV-2 感染發病的報道,而西南地區鯽大規模暴發鯽皰疹病毒病的報道和研究較少。近年來,隨著四川省漁業持續健康發展,包括鯽在內的各類經濟魚類養殖規模逐漸擴大。為了避免疾病暴發帶來的經濟損失,需要加強對病原的診斷和研究。本實驗對四川自貢某養殖場發病鯽進行病原診斷和病理學研究,通過臨床剖檢、病理學觀察、人工感染和分子生物學檢測等手段,證實此次發病病原為 CyHV-2。從臨床病理、組織病理到超微病理,系統地研究了CyHV-2 對組織器官造成的病理損傷,為該病原的致病機制研究提供了實驗依據。

            1 材料與方法

            1.1 實驗材料

            送檢患病鯽20 尾(體長 20~25 cm),來源于四川自貢某鯽養殖場;健康鯽45尾 (體長10~14cm),購自四川成都某鯽養殖場;鯉上皮瘤細胞系 (epithelioma papulosum cyprinid cell line,EPC)和 胖頭鯉肌肉細胞系 (fathead minnow cell line,FHM)(本實驗室保存); M199/DMEM 營養液和胎牛血清 (FBS)購自HyClone公司;腦心浸液培養基(BHI)購自北京索萊寶科技有限公司;DNAMarker、pMD-19T質粒連接試劑盒和PCR-Mixreaction buffer購自寶生物工程 (大連) 有限公司;DH5α感受態細胞、組織基因組DNA提取試劑盒及普通瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒購自天根生化科技 (北京) 有限公司。

            1.2 剖檢及樣本采集

            對瀕死鯽進行病理剖檢,取鰓、肝臟、脾臟和腎臟等組織于載玻片上涂片,革蘭氏染色后鏡檢。無菌條件下,取肝臟、脾臟和腎臟劃線接種于 BHI 平板,28 °C 恒溫培養 48 h 后觀察有無細菌生長。取鰓、肝臟、腎臟、脾臟和心肌組織用10% 的中性甲醛溶液固定,對固定后的組織修塊,通過不同濃度的乙醇進行梯度脫水,然后通過二甲苯對組織進行透明處理。將組織放于熔化的石蠟中,置于 65 °C 的恒溫箱中,2 h 后對組織進行包埋,蠟塊凝固后可進行修整及切片,將蠟片貼于干凈的載玻片上,烘干后進行脫蠟、滲水及蘇木精—伊紅 (H.E) 染色,用中性樹膠封片,烘干后在光學顯微鏡下觀察其主要病變并照相記錄。取適量腎臟和脾臟組織用 2.5%戊二醛浸泡固定,磷酸鹽緩沖液 (PBS) 漂洗后,用1% 鋨酸固定,不同濃度梯度的乙醇使組織脫水,環氧樹脂包埋后,制成超薄切片,染色烘干,通過透射電鏡觀察并拍照記錄。此外,采集鰓、脾臟、腎臟和肝臟組織凍存于?80 °C,用于病毒分離培養及組織 DNA 提取。

            1.3 病毒分離培養

            取脾臟和腎臟組織,無菌條件下剪碎后,用杜氏磷酸鹽緩沖液 (DPBS) 按 1∶10 比例制成組織勻漿,加入青霉素—鏈霉素溶液(1 000 IU/mL),反復凍融 3 次后于 4 °C 條件下 12 000 r/min 離心20 min。收集上清病毒懸液,用 0.22 μm 的無菌濾膜過濾后接種到 25 cm 2 的鋪滿單層細胞的細胞培養瓶中,25 °C 下孵育 1 h 后棄病毒懸液,加入新鮮的培養液 (含有 2% FBS,1% 雙抗) 5 mL,置于 25 °C培養箱中培養。

            1.4 人工感染實驗

            取患病鯽鰓和腎臟組織,用 DPBS 制備組織勻漿,加入青霉素—鏈霉素溶液 (1000 IU/mL),反復凍融 3 次后,4 °C 下12000 r/min 離心 20min。收集上清液,用 0.22 μm 的無菌過濾器過濾,?20 °C保存。將健康鯽暫養 7 d 后,隨機挑選 5 尾,提取組織 DNA 后進行 PCR 檢測,結果顯示 CyHV-2 為陰性。隨后將剩余 40 尾健康鯽分為 2 組,每組 20 尾,實驗組每尾腹腔注射 0.2mL 的組織勻漿液,對照組每尾注射 0.2 mL的無菌生理鹽水,實驗期間水溫控制在 23~25 °C,每天觀察 2 次,連續觀察 1 個月,記錄死亡數并繪制累積死亡曲線。

            1.5 PCR 鑒定

            將采集的患病鯽組織 (鰓、脾臟和腎臟等)用 PBS 研磨制成組織勻漿后,按照血液/組織/細胞基因組提取試劑盒 (天根) 說明書進行總 DNA的提取,?20 °C 保存。

            CyHV-2 特異性引物參照 Waltzek 等 [15] 的方法設計并送至生工生物工程 (上海) 股份有限公司合成,用于擴增 CyHV-2 特有的高保守片段解旋酶基因 (Hel)(表 1)。反應體系:12.5 μL Mix-reaction buffer,上下游引物各 1 μL(10 μmol/L),DNA 模板 1 μL(10 ng/μL),9.5 μL ddH 2 O,陰性對照模板用 ddH 2O 補齊。PCR 擴增條件:95 °C預變性 5 min;94 °C 變性 1 min,60 °C 退火 1 min,72 °C 延伸 1 min,共 35 個循環;72 °C 終延伸10 min,1% 的瓊脂糖凝膠電泳檢測 PCR 擴增產物。PCR 產物經 DNA 純化試劑盒純化后,送生工生物工程 (上海) 股份有限公司進行序列測定,將測序結果在 GenBank 上進行 BLAST 比對。

            1.6 Hel 基因克隆測序及系統發育分析

            將“PCR 鑒定”部分中的 PCR 產物通過普通瓊脂糖凝膠 DNA 回收試劑盒純化后,連接到pMD19-T 載體上,轉化到 DH5α 感受態細胞中。37 °C 恒溫過夜培養后挑取單個菌落進行菌落PCR 篩選陽性克隆菌株,提取質粒送生工生物工程 (上海) 股份有限公司進行序列測定。根據GenBank 收錄的不同 CyHV-2 毒株的 Hel 基因序列,使用 DNAstar 生物學軟件 Megalign 方法進行序列同源性分析,并通過 MEGA 6 軟件,使用鄰接法構建系統進化樹進行遺傳進化分析。

            2 結果

            2.1 患病鯽的臨床及組織病理學觀察

            患病鯽臨床表現為浮頭、離群獨游、體表發黑、食欲不振、體表有出血現象、背鰭及尾鰭末端發白等。解剖可見鰓蓋有點狀出血,鰓絲出血、壞死;腸系膜有出血現象;肝臟、脾臟和腎臟均有不同程度的出血及腫脹;魚鰾點狀出血 (圖版 Ⅰ)。涂片革蘭氏染色鏡檢未觀察到細菌,BHI 平板 28 °C 培養,未分離到細菌。

            圖版 Ⅰ患病鯽的臨床和剖檢病變

            1、2. 患病鯽體表有大量出血點和出血斑,其中 1-1. 鰓絲有明顯出血和壞死,1-2. 尾鰭出血,末端發白;3. 患病鯽剖檢觀察,多組織器官出血,3-1. 腎臟腫大,有出血點,3-2. 肝臟和脾臟腫脹,有不同程度的出血,腸道表面出血嚴重,3-3. 魚鰾上有大量大小不等的出血點

            組織病理學觀察顯示,多組織呈現不同程度的壞死,鰓、脾臟和腎臟病變尤為明顯。鰓主要表現為呼吸上皮細胞變性、脫落和壞死(圖版 Ⅱ-1),相鄰的鰓小片出現融合黏連,大量淋巴細胞浸潤,部分呼吸上皮細胞出現核染色質邊緣化(圖版 Ⅱ-2);脾臟可見嚴重的彌漫性壞死,有多個大小不等的壞死灶 (圖版 Ⅱ-3),血細胞及炎癥細胞浸潤,血管壁的纖維細胞壞死,大量淋巴細胞出現核分裂或染色質邊緣化 (圖版 Ⅱ-4);腎臟表現為局灶性壞死病變,腎小管上皮細胞壞死嚴重,細胞核肥大、固縮、碎裂,空泡化嚴重(圖版 Ⅱ-5),大量炎癥細胞浸潤,腎小球毛細血管擴張 (圖版 Ⅱ-6);肝臟主要表現為嚴重的空泡變性,部分細胞壞死,組織結構被破壞 (圖版 Ⅱ-7);心肌有輕微的炎癥反應,出現少量的炎癥細胞浸潤 (圖版 Ⅱ-8)。

            圖版 Ⅱ患病鯽的組織病理觀察(H.E染色)

            1、2. 鰓小片呼吸上皮細胞腫脹、脫落,出現核染色質邊緣化 (▲),大量淋巴細胞浸潤 (→),相鄰的鰓小片發生融合黏連 (★); 3、4. 脾臟壞死嚴重,有很多大小不等的壞死灶 (★),一些細胞出現核染色質邊緣化 (→),血管壁的纖維細胞壞死 (▲);5、6. 腎臟表現為局灶性壞死,腎小管上皮細胞壞死嚴重 (★),腎小球毛細血管擴張 (→),大量炎癥細胞浸潤 (▲),細胞核染色質出現邊緣化 (□);7. 肝臟出現嚴重的空泡變性,細胞結構被破壞 (→);8. 心肌有輕微的炎癥,少量淋巴細胞浸潤 (★),細胞核染色質邊緣化 (→)

            2.2 超微病理學觀察

            透射電鏡觀察到脾臟和腎臟中存在 4 種不同形態的病毒粒子,分別為 DNA 病毒內核、空衣殼、實心衣殼和有包膜的成熟病毒粒子(圖版Ⅲ-1)。病毒內核直徑為 55~110 nm;空衣殼病毒直徑為120~170 nm;實心衣殼病毒直徑為 120~170 nm;有包膜成熟病毒直徑為 170~210 nm。CyHV-2 的3 種未成熟病毒顆粒形態主要存在于細胞核中,具有囊膜的成熟病毒粒子則大量分布在細胞質中 (圖版Ⅲ-2,3),說明 CyHV-2 是在細胞核中完成復制和組裝并在細胞質中獲得外膜,符合皰疹病毒感染過程。當病毒感染細胞后,透過細胞膜磷脂雙分子層,進入細胞核釋放出雙鏈 DNA,構成病毒內核。通過編碼衣殼蛋白在細胞核內形成空衣殼,此時的病毒 DNA 還未進入衣殼內部,當病毒 DNA 進入空衣殼后變為實心衣殼。實心核衣殼通過核膜以出芽的方式進行包被形成囊膜,進入到細胞質中 (圖 1)。透射電鏡下觀察發現,脾臟和腎臟發生了明顯的細胞結構病變。脾臟中淋巴細胞的細胞核出現染色質變性、邊緣化 (圖版Ⅲ-2);線粒體出現腫脹、嵴斷裂,嚴重時局部溶解消失 (圖版Ⅲ-3)。腎臟中細胞核碎裂,核染色質邊緣化,局部核膜溶解,可見未成熟的病毒顆粒 (圖版Ⅳ -1),部分線粒體腫脹、嵴斷裂,可見成熟的病毒顆粒 (圖版Ⅳ-2)。

            圖版 Ⅲ 患病鯽脾臟組織超薄切片電鏡觀察

            1. 細胞核出現變性,可見核染色質邊緣化,核內有大量不同時期的病毒粒子;2、3. 線粒體腫脹,嵴壞死斷裂,病毒穿過核膜 (→),成為成熟病毒顆粒 (★);4. 四個不同時期的病毒粒子;N. 細胞核,M. 線粒體,下同

            圖版 Ⅳ 患病鯽腎臟組織超薄切片電鏡觀察

            1. 細胞核碎裂,核染色質邊緣化,有大量病毒顆粒 (→),2. 線粒體腫脹,嵴壞死斷裂,細胞質中觀察到成熟病毒顆粒 (→)

            2.3 病毒的分離培養

            將病毒懸液接種于EPC及FHM細胞后,連續傳代3次,無明顯病變,表明FHM和EPC細胞系對CyHV-2感染不敏感。

            圖 1 皰疹病毒復制和組裝過程模式圖

            2.4 人工感染實驗

            人工感染實驗結果顯示,組織勻漿攻毒的實驗組鯽在第 2 天開始出現臨床癥狀,第 4 天出現死亡,第8 天大量死亡,連續觀察1 個月后,累計死亡率為80%。對照組的鯽表現正常,無死亡(圖2)。

            圖2 人工感染實驗結果

            2.5 PCR 鑒定

            提取自然感染鯽及人工感染后瀕死鯽的鰓、肝臟、脾臟及腎臟制成組織勻漿后,提取總DNA,利用特異性引物進行 PCR 擴增,產物經1% 瓊脂糖凝膠電泳后,可見大小為 366 bp 的特異性條帶,與預期的目的條帶大小一致 (圖 3)。將擴增的目的片段送生工生物工程 (上海) 股份有限公司測序后通過 NCBI 數據庫進行 Blast 比對,結果顯示,該病毒序列與 GenBank 中 CyHV-2(YZ-01 株) 的 Hel 基因同源性為 99%。

            圖3 患病鯽CyHV-2 PCR擴增

            (a) 患病鯽樣品 PCR 檢測,M. DNA Marker 1000, 1. 陰性對照, 2. 陽性對照, 3~5 送檢患病鯽樣本;(b) 人工感染實驗抽檢樣本 PCR 擴增,

            2.6 Hel 基因克隆測序及基因系統發育分析

            將克隆得到的目的序列送至生工生物工程(上海) 股份有限公司測序后,將序列上傳至NCBI-GenBank,登錄號為 MK913427。在 NCBI數據庫中下載 CyHV-2 不同株的 Hel 基因片段序列,以及 CyHV-1 和 CyHV-3 的相關序列,利用鄰接法構建系統進化樹。系統進化分析結果顯示,目的序列(ZYJ-11) 與不同株的CyHV-2 聚為一支(圖 4)。

            圖4 基于 CyHV-2 DNA 解旋酶基因部分序列同源性的系統進化分析

            3 討論

            本次送檢的發病鯽臨床癥狀與先前報道的鯽皰疹病毒病相似,主要表現為魚體發黑、食欲減退、尾鰭末端發白,體表和鰓絲有不同程度的出血。剖檢后可見肝臟、脾臟有出血和腫脹,特征性病變為鰾點狀出血,有的患病鯽腹腔有腹水。組織病理主要表現為鰓絲呼吸上皮細胞變性、壞死,相鄰的鰓小片出現黏連融合;腎臟有局灶性壞死病變,腎小管上皮細胞壞死嚴重,腎小球毛細血管擴張充血;脾臟可見嚴重的彌漫性壞死。PCR 檢測 CyHV-2 的 Hel 基因片段,擴增出符合預期大小的條帶;通過對擴增出的 Hel 基因序列進行系統發育分析顯示,其與 CyHV-2 基因同源性高。腹腔注射患病鯽的組織勻漿感染健康鯽,出現相同的臨床癥狀并造成 80% 的累積死亡率。通過以上實驗結果可以確定此次疾病暴發的病原為 CyHV-2。

            CyHV-2 作為金魚造血器官壞死癥的病原,自從 1992 年在日本首次被報道后便開始在世界范圍內流行傳播 [3-11] 。2009 年江蘇省養殖的鯽大規模暴發重度出血性疾病,并于 2011—2012 年在省內各地流行。Xu 等[10]確診這一疾病是由CyHV-2 感染引起。Wang 等 [16] 在 2012 年報道了CyHV-2 感染異育銀鯽 (C. auratus gibelio) 的病例,這次的疾病暴發給中國東部地區池塘養殖的異育銀鯽造成了嚴重損失,部分池塘的死亡率高達100%。隨后在北京、武漢、廣州、江西、江蘇等多地養殖金魚或鯽體內陸續檢測到 CyHV-2 [17-20] 。而西南地區關于鯽感染 CyHV-2 發病并造成大規模死亡的報道較少,本實驗室曾于 2016年四川成都某養殖場飼養彩鯽中檢測到 CyHV-2的感染 [21] 。而此次研究確診了 2018 年 10 月四川自貢地區養殖鯽大規模死亡的病原為 CyHV-2,表明隨著西南片區鯽養殖業的發展及貿易往來,使得 CyHV-2 已經逐漸從疾病高發的東部傳入西南地區。為有效控制疾病的傳播,應更加重視對 CyHV-2 的監測及防治。

            組織病理觀察顯示,鰓、腎臟和脾臟是病變嚴重的器官,其余組織器官主要表現為多灶性及不同程度的炎癥反應。Ding 等 [22] 通過熒光原位雜交的方法直接檢測組織中的病原體,觀察到最大熒光強度出現在鰓、腎臟壞死灶,脾臟和肝臟觀察結果與本研究組織病理學觀察結果相似。鰓組織中病毒分布集中在壞死部位且含量較高,推測病毒能通過鰓絲進入魚體并在鰓中復制,從而導致呼吸上皮細胞脫落和壞死,如果想要進一步了解鰓損傷的致病機制,仍需研究宿主與病毒在鰓中的相互作用。鰓絲上較高的病毒載量也可能說明 CyHV-2 能通過鰓絲釋放到水中進行傳播,這種方式能很好地解釋鯽皰疹病毒病傳播速率快的特性。但是 Costes等 [23]研究表明,與 CyHV-2 相同病毒屬的鯉皰疹病毒3 型 (CyHV-3) 可以通過皮膚進入鯉 (Cyprinus car-pio) 體內,而 Ito 等[24]也通過浸泡含 CyHV-2 的病毒懸液成功感染了健康金魚,因此對于 CyHV-2 的傳播途徑還需進一步驗證。Goodwin等[4]通過實時熒光定量 PCR 檢測到脾臟和腎臟的病毒拷貝量高,Ito 等 [24] 和姚卓鳳 [25] 通過 PCR 檢測到人工感染 28 d 后,死亡魚體組織中均能檢測到CyHV-2,但存活魚只能在腎臟中檢測到 CyHV-2。結合本研究的組織病理觀察及電鏡觀察發現,腎臟是病變最嚴重的組織且含有大量的病毒顆粒,推測腎臟是 CyHV-2 復制的主要器官,在臨床中用于檢測 CyHV-2 感染更加可靠。此外,電鏡觀察發現 CyHV-2 病毒粒子主要存在于細胞核或細胞質中,并未直接感染線粒體,但線粒體卻有不同程度的損傷,可能是病毒粒子對細胞核造成了損傷,加上組織器官大量出血從而導致細胞處于缺血缺氧的狀態,導致了線粒體的損傷。

            Jung 等[2]將患病魚的脾臟、腎臟組織勻漿過濾后接種到 FHM、EPC、羅非魚卵巢細胞系(tilapia ovary cell line,TO-2)、虹鱒生殖腺細胞系(rainbow trout gonad cell line, RTG-2)、鮭胚胎細胞(chinook salmon embryo cell, CHSE-214) 和鰻腎細胞 (eelkidney cell, EK-1) 上,只有 EPC 和 FHM 出現了明顯的細胞病變效應,但未成功傳代到第4 次。王璐 [18] 、徐進等 [20] 將患病鯽組織勻漿接種到錦鯉鰭條細胞系 (koi-fin cell line,KF),觀察到明顯的細胞病變效應,但也有用 EPC、FHM 和KF 細胞系分離病毒未引起 CPE 的報道[6, 16, 26-28] 。本研究中使用 EPC 及 FHM 對病毒進行分離,在盲傳 3 代后未出現細胞病變效應,這與之前的研究結果相同。進一步證實了 EPC 及 FHM 細胞系不適用于 CyHV-2 的體外培養。為了建立更適合分離 CyHV-2 的細胞系,李霞等 [29] 和 Ito 等 [30] 成功分離了金魚的鰭細胞系 (goldfish-fin cell line,GFF),并進行了傳代培養,接種病毒濾液后出現CPE 并能穩定傳代。此外,SRTF (standard ryukintakafumi)、 RyuF-2 (ryukin goldfish-fin)、 GiCB(gibel carp-brain)、 GiCF (C. auratus gibelio-caudalfin) 等對 CyHV-2 敏感的細胞系也陸續被建立且具有穩定傳代,病毒濃度高等特點 [28, 31-32] 。

            CyHV-2 感染引起的死亡率高、危害大、傳染性強,已經成為我國鯽養殖業的主要威脅。本研究首次報道了四川省人工養殖鯽感染 CyHV-2,并對患病鯽的組織病理及細胞超微病理進行了研究。此外,觀察到處于不同時期的 CyHV-2病毒顆粒及病毒包被核膜的過程,探討了皰疹病毒復制組裝的過程,為 CyHV-2 致病機制的研究提供了重要依據。雖然目前對于 CyHV-2 各方面的研究已經逐漸深入,在病毒潛伏感染特點、開發快速有效的檢測方法以及建立對其敏感的細胞系等方面都取得了一定的成果 [20, 24, 33-36] ,但如何有效治療魚類病毒性疾病仍是水產養殖中一個亟待解決的難題。因此,目前只能通過完善養殖過程中的預防措施,提高對疾病的防范意識來降低病毒性疾病的暴發。

            作者:周瑤佳 1 , 田思璐 1 , 許佳雪 1 , 李尹麒 1 , 楊 悅 1 , 耿 毅 1 ,黃小麗 2 , 陳德芳 2 , 汪開毓 1 , 歐陽萍 1*

            (1. 四川農業大學動物醫學院,四川成都 611130;2. 四川農業大學動物科技學院,四川成都 611130)

            來源:水產學報, 2020, 44(9): 1397?1407

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